分析牛磺胆酸的纯化

 分析牛磺胆酸的纯化

将所提结合胆汁酸的粗品缓慢加入长60 cm，内径5 cm的硅胶层析柱上， 固定相为硅胶 G， 流动相为体积比为 3∶2的氯仿和正丁醇。 在常温常压下 ，线速度为 μ=10.5 ml/min，同时收集流出液。

用紫外分光光度计在 λ=460 nm（此处牛磺胆酸有最大吸收值）处检测吸收值，并收集有吸收值的液体，用薄层层析板进行定性检测，用微量进样器吸取 5～10 μl 的TCA标准品及待测液进行点样（以硅胶 G 为固定相，展开剂为氯仿∶异丙醇∶醋酸∶水=30∶30∶41，上行展开，显色剂为 20%的硫酸和3.5%的磷钼酸）。斑点颜色为蓝紫色，出现两个或两个以上斑点表明不纯。 以标准品作为对照，收集显色时只有牛磺胆酸一个点的液体，置于旋转蒸发仪中浓缩，回收流动相氯仿和正丁醇，收集白色结晶冷冻保存，即为牛磺胆酸的纯品。

薄层层析定性检测TCA样品以TCA标准品为对照，收集的白色结晶为 TCA 样品，在薄层层析板上点样进行定性分析。固定相、展开剂和显色剂同上。

薄层扫描法定量检测TCA样品用CS-930双波长薄层扫描仪对显色后的薄层层析板进

行全波扫描，确定牛磺胆酸标准品和待测样品的最大吸收波长都是400 nm。在λ=400 nm

处用薄层扫描仪对TCA样品进行扫描，用峰面积计算含量，定量检测牛磺胆酸的纯度。 3

个样品取均值。

回收率的测定从同批次胆汁酸粗品中取等量的两份， 其中 1 份加入0.5 g牛磺胆酸标准品，两份都用层析柱进行纯化，分别收集所得牛磺胆酸进行计算。