摘 要 目的: 研究不同提取方法对人工牛黄中胆酸含量的影响。方法: 选择 3 个不同产地的人工牛黄, 采用经水解处理和未经水解处理 2 种方法提取胆酸, 并用高效液相色谱- 蒸发光散射检测法测定胆酸含量。 结果: 经水解处理的样品中胆酸含量高于未经水

解处理的同批样品。 结论: 水解过程将人工牛黄中的结合型胆酸转化为游离型胆酸, 从而使胆酸的含量升高。 因此, 将总胆酸含量和游离胆酸含量共同作为人工牛黄质量控制的指标更为合理。

关键词 人工牛黄; 胆酸; 水解; 高效液相色谱- 蒸发光散射检测法; 含量

XU Zh en _zh e n , H U A N G Y i _ p in g( J iang su Pr o vin c ial A cademy of T r adit ion al Ch inese M edicine, N anjin g210 028, Ch ina)

Y U Jin g_ jing ( N a n jin g U niver s ity o f T r adit ion al Ch in e s e M edicine, N an jing 210 046, Ch ina)

WAN Y u an_ son g( N anjin g U n i v e r s it y of T ec h n ology , N an jing 2100 09, Ch in a)

ABST RACT OBJ ECT IV E: T o s t udy t he ef f ect s o f di f f er ent ex t r act i on m et ho ds o n t he co nt ent of chol al i c aci d f r om Ar t i f i ci al Bez o ar1 M ET H OD S: A r t i f i ci al Bez oa r f rom 3 di f f er ent habi t at s w as us e d t o ex t ract chol al i c aci d by hy drol i z at i o n vs 1 hy -dr ol i z at i on - f re e m et hod, and t he cont e nt o f chol al i c a ci d w as det er mi ne d by HP L C- EL SD ( hi gh per f or mance l i qui d chr o -m at o gr aphy w i t h ev apor at i ve l i g ht s cat t er i ng det e c t i o n) 1 R ESU L T S : T he cont e nt o f cho l al i c aci d i n t he hy dro l y z e d s ampl e w as hi g her t han t hat i n t he non - hydr ol yz ed s ampl e of t he s ame ba t ch1 CO N CL U S IO N : T hro ugh hy dro l i z at i on, t he bi ndi ngcho l al i c aci d i n t he ar t i f i ci al be z o ar w as t r ans f o rm ed i nt o f ree cho l al i c aci d s o t hat t he cont ent of chol al i c a ci d w as i ncreas ed1 T her ef or e, i t i s mo re r eas onabl e t o cont ro l t he qual i t y of A rt i f i ci al Bez oar by t aki ng t he co nt ent s of t ot al chol al i c aci d and f reecho l al i c aci d as i ndex es 

K EY WORDS A rt i f i ci al Bez o ar ; Chol al i c aci d; H y dr ol yz es ; HP L C- EL SD; Content

 

人工牛黄是许多复方制剂不可缺少的重要原料, 其主要成分为胆红素、 胆酸、 去氧胆酸及猪去氧胆酸, 具有解热、 祛痰、抑菌等作用。由于天然牛黄资源少、价格昂贵、性质不稳定, 国内大部分厂家在生产含有牛黄的中药制剂中, 多采用人工牛黄代替天然牛黄入药, 因而控制人工牛黄的质量显得尤为重要。胆酸是人工牛黄的主要有效成分和质量控制指标之一。有文献报道, 含人工牛黄制剂中胆酸的提取方法不统一, 有水解过程和无水解过程的方法均有使用^{[ 1~ 3]}。笔者就不同提取方法对胆酸含量的影响进行了研究。

1100 型高效液相色谱 ( HP L C) 仪 ( 美国 A g i l ent 公司) ;

A l l t e ch EL SD 2000 型检测器 ( 美国奥泰科技有限公司) ; 万分之一及十万分之一电子天平 ( 瑞士梅特勒- 托利多集团) ;T G L - 16G 型离心机( 上海安亭科学仪器厂) 。

人工牛黄( 购自西藏药材公司、 南京市药材公司、 苏州雷允上制药有限公司, 经许珍珍实习研究员鉴定为人工牛黄) ; 胆酸对照品( 中国药品生物制品检定所, 批号: 100078- 200414) ; 乙腈、 乙酸为色谱纯。

色谱柱: ZO RBX- S B- C 18( 250 mm @ 416 mm , 5Lm) ; 流动相: 乙腈- 013% 乙酸溶液( 65 B 35) ; 流速: 018 mL # m i n- 1;柱温: 35 e ; EL SD 漂移管温度: 9913 b C; 载气流量: 217 L #m i n- 1; 进样量: 20LL 。以外标两点对数方程计算样品含量, 运行时间: 30 m i n。 理论塔板数按胆酸峰计算应不低于 4 000。 色谱见图 1。

2.2.1 供试品溶液( 1) : 精密称取 3 个产地的人工牛黄细粉各012 g, 置于具塞锥形瓶中, 加入 50 mL 甲醇, 称定质量, 超声处理 30 mi n, 再称定质量, 加甲醇补足减失的质量, 摇匀, 滤过, 精密吸取续滤液 25 mL , 水浴蒸干, 残渣加 20% N aOH 溶液 10m L , 加热回流冷却, 加稀盐酸 19 mL , 调 pH 至酸性, 用乙酸乙酯提取4次( 25、 25、 20、 20 mL ) , 提取液均用同一有少量无水硫酸钠的脱脂棉滤过, 合并提取液, 回收溶剂至干, 残渣加甲醇溶解并转移至10 mL 容量瓶中, 加甲醇至刻度, 即得。

2.2.2 供试品溶液 ( 2) : 精密称取3个产地的人工牛黄细粉012 g, 置于具塞锥形瓶中, 加入 50 mL 甲醇, 称定质量, 超声处理 30 mi n, 再称定质量, 加甲醇补足减失的质量, 摇匀, 滤过, 精密吸取续滤液 25 mL , 水浴蒸干, 残渣加甲醇溶解并转移至 10m L 容量瓶中, 加甲醇至刻度, 即得。中国药房 2009 年第 20 卷第 9 期 Ch ina Pharmacy 2009 V ol. 20 No. 9 # 665 #5中国药房6杂志 ) ) ) 5 文摘杂志6( A J) 收录期刊, 欢迎投稿、 订阅

2 .3 对照品溶液的制备

精密称取胆酸对照品 4155 mg , 置于10 mL 量瓶中, 以少量甲醇溶解并稀释至刻度, 即得。

2.4 线性关系考察

依次精密吸取 3、 5、 10、 15、 20、 25 L L 对照品溶液, 注入色谱仪, 按照上述色谱条件进样分析。以胆酸峰面积积分值的对数( Y ) 为纵坐标, 进样量的对数( X ,L g ) 为横坐标, 进行线性回归, 得回归方程为 Y =11231 5X ) 01090 1( r =01999 5) 。 结果表明, 胆酸进样量在 11365~ 111375 L g 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2 .5 精密度试验

精密吸取胆酸对照品溶液 10LL , 按照上述色谱条件连续进样 5 次, 测定。 结果, RS D =0134% , 表明仪器精密度良好。

2 .6 稳定性试验

精密称取产地为南京的人工牛黄, 按照/ 2120 项下供试品( 1) 和供试品 ( 2) 的制备方法分别制备 1 份, 分别精密吸取 5LL , 按照上述色谱条件每隔 1 h 进样一次, 测定, 共测定 8 h。 结果, RS D 分别为 0134% 、 0137% , 表明供试品溶液在 8 h 内稳定。

2 .7 重现性试验

精密称取产地为南京的人工牛黄, 按照/ 2120 项下供试品

( 1) 和供试品( 2) 的制备方法分别制备 5 份, 按照上述色谱条件进样, 测定峰面积。结果, 峰面积的 RS D 分别为 0157% 、0132% , 表明方法重现性良好。

2.8 加样回收率试验

称取已知含量的样品 011 g , 置于锥形瓶中, 加入一定量的胆酸对照品, 按照/ 212 0项下方法制成供试品溶液( 1) 和供试品溶液( 2) , 按照上述色谱条件进样, 测定峰面积。结果, 3 个产地的供试品 ( 1) 平均加样回收率分别为 97143% 、95164% 、95126% , RS D 分别为 0196%、 1197% 、 0190% ( n =9) ; 3 个产地的供试品 ( 2) 平均加样回收率分别为 95156% 、97162% 、96168% , RSD 分别为 0152% 、 0139% 、 0128% ( n =9) 。

2.9 样品含量测定

精密吸取对照品溶液 10 L L 、 不同产地的人工牛黄供试品溶液( 1) 和( 2) 各 10LL , 按照上述色谱条件测定胆酸含量, 结果见表 1。

 
由以上结果可知, 同批人工牛黄制备的供试品 ( 1) 含量均高于供试品 ( 2) , 即经过水解处理的样品胆酸含量高于未经水解处理的同批样品。

3 讨论

人工牛黄由牛胆粉、 胆酸、 猪去氧胆酸、 牛磺酸、 胆红素、 胆固醇、 微量元素等制成[ 4]。而牛胆粉中含有以酯键与氨基酸结合的结合型胆酸[ 5, 6]。 在水解过程中, 牛胆粉中的结合型胆酸转化成游离型胆酸, 因此造成经过水解处理的人工牛黄中胆酸含量高于未经水解处理的人工牛黄。笔者认为, 在人工牛黄质量控制的研究中, 将总胆酸的含量与游离胆酸含量共同作为人工

牛黄质量控制的指标更为合理。

[ 1] 李文春, 孙永慧 1H PL C- EL SD 法测定青羚散中胆酸的含量[ J ] 1 中国实验方剂学杂志, 2005, 11( 5) : 181

[ 2] 江英桥 1H PL C- EL SD 法测定清开灵注射液中胆酸和猪去氧胆酸的含量[ J ] 1 中国药品标准, 2006, 7( 4) : 311

[ 3] 司徒少金, 罗建明, 马玲云, 等 1HP L C- EL SD 测定消痔灵片中胆酸的含量[ J ] 1 中药材, 2005, 28( 4) : 3441

[ 4] 国家药典委员会编 1 中华人民共和国药典( 一部) [ S] 12005 年版 1 北京: 化学工业出版社, 2005: 41

[ 5] 林启寿 1 中草药成分化学[ M ] 1 北京: 人民卫生出版社,1986: 4251

[ 6] 鞠爱华, 杨九艳, 孟永梅, 等 1 牛胆粉等 3 种特色蒙药材的薄层色谱鉴别研究。时珍国医国药.200.18