牛磺熊去氧胆酸结构及性质的研究

    摘要：本文对牛磺熊去氧胆酸(简称TUI~A)结构及性质进行了研究，结果表明：游离TUDCA是易溶于水的酸性化台物，其1％水溶液pH2～3‘差热分析测得其含两分子结晶水，且mp为180．4℃；元素分析结果，其C、H、N平均含量分别为57．75％、8．77及2．61；红外光谱表明具有典型的酰胺基、羟基及磺基吸收；”CNMR表明酰基C：·6为177．4ppm．羟亚甲基Cs及C6均为71．7ppm．牛磺酸基团中Cs及Cs的6分别为37．6ppm及50．8ppm=质谱分析测得其(MWNa)一为522，与计算值521．70完全相同；比旋光度测定结果，其[q]=+43．28。．与计算值相一致薄层层析结果值为o．31～0．32}磺酸基试验及其水解产物薄层色谱结果确证其分子中含磺酸基及熊去氧胆酸(UDCA)基团‘几种胆酸Gregory—p~eoe反应物吸收光谱还表明，113DCA分子中牛磺酸基团对显色反应产生显著影响。

    关键词牛碉碥去氧胆酸；差热分析；薄层层析；熊去氧胆酸；鹅去氧胆酸；

    牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)化学名称为3，75-二羟基胆烷酰一Ⅳ一牛磺酸，是由熊去氧胆酸(UDCA)的羧基与牛磺酸的氨基之间缩水而成的结合型胆汁酸。1902年自熊胆中发现TUDCAE，其为熊胆中主要胆汁酸，具有解痉、抗惊厥、抗炎及溶胆石等作用_2’。迄今国内尚未见自熊胆中分离或用化学法合成TUDCA的报道。13本金识定一等于1955年报道了TUDCA合成方法]，但迄今所合成之产物均为其钠盐形式，均未获得游离形TUD—CA。

    为确定TUDCA结构及观察其性质，本研究对自行合成的产物进行了差热、核磁共振、质谱、红外光谱、元素组成、磺基定性、水解试验及薄层色谱等分析试验，并测定了产物的比旋光度。同时，还对TULSA及其它几种有关胆酸的糠醛显色反应物进行吸收光谱比较试验为TUDCA合成、分析及药理学试验提供了有关参数。

    l实验部分
    1．1仪器与药品
    差热分析仪；红外分析仪；元素分析仪；旋光仪；核磁共振仪；质谱仪；uV一300型紫外分光光度计；分光光度计(上海第三分析仪器厂)。TUDCA标准品(自行合成，六次纯化，薄层色谱均为单一斑点)；TUDCA钠盐，UD-CA原料药(日本进口，含1．6以下的鹅去氧胆酸){鹅去氧胆酸{牛磺鹅去氧胆酸钠盐；胆酸。

    I．2差热分析
    本品经105℃烘至恒重，由南京师范大学理化分析中心用差热分析仪进行熔点及结晶水分析，熔点测定是在25℃~250~C之间，升温速度为20℃／rain，测得mp为I80．4℃；结晶水测定是在50℃～320C之间．升温速度为20℃／min，当温度由I54℃上升至215℃时，样品重量减失7．0，相当于两分子结晶水但按药典方法E，6批样品测定结果，其发泡点均在98"C～ll8℃之间，Sigma公司TUDCA钠盐发泡点为108"C～154℃，均难以测出熔点。

    I．3元素分析
    本品于105~C烘至恒重．由南京大学现代分析中心及本校理化测试中心用PcrkinElmer公司元素分析仪8次分析结果，其C、H、N平均含量分别为C57．75，H8。77，N2．61，其理论值分别为C58．29，H9．22．N2．61；美国Sigma公司TUDCA钠盐分析结果为C54．35，H8．09，N2．07，其理论值分别为c59．86，H8．50，N2．68。

    1．4红外光谱
    本品真空干燥后．经本校理化测试中心用红外光谱仪分析结果。

    I．5核磁共振
    本品及Sigma公司TUDCA钠盐，以重水为溶剂，=烷为内标，用FX900型核磁共振仪测定了'CNMR谱。

    I．6质谱分析
    本品含极性基团，难于分析．本校理化测试中心将其转化为钠盐形式，用NicoletFTMS-2000型质谱仪并采用激光法分析结果。

    I．7TUDCA性质的研究

    1．7．1TUDCA一般性质的研究本品为白色粉末，无臭味，味苦，极易吸湿．易溶于水、乙醇、甲醇、丙酮及冰醋酸．I水溶液pH2～3，但不溶于醋酸乙酯、乙醚、石油醚及氰仿等溶剂。其固体或水溶液于80C以上较长时间加热则发生变化，颜色变黄并形成副产物。

    1．7．3薄层层析TUDCA样品配成l乙醇溶液，采用硅胶G—CMC薄板层析，展开剂为异戊醇一冰醋酸一水(18t5：3)，显色剂为5磷钼酸乙醇溶液，点样量为11，其余操作与药典方法”相同。结果4批样品的R值均在0．31～0．32。

    1．7．4磺酸基定性试验在两支试管中分别加TUDCA及牛磺酸0．1g，然后两管各加甲酸钠0．1g；另取试管1支，加甲酸钠0．1g为对照管。各管上端均塞以醋酸铅棉花团，其后操作按文献方法进行。结果TUDCA管及牛磺酸管均释放出HS气体，醋酸铅棉团变黑，表明TUDCA与牛磺酸相同，均含有磺酸基团，而对照管呈阴性反应。

    2讨论
    2．1TUDCA的”CNMR谱未见报道，合成的游离TUDCA”CNMR谱与Sigma公司TUD—CA钠盐基本相同．其分子中各碳原子的化学位移亦与有关化舍物相一致；TUDCA红外光谱具有典型的酰胺基、甲基、亚甲基及磺基的吸收特征}质谱分析结果，其(MWNa)为522，与理论值完全一致；元素分析表明，合成的TUDCAC、H、N含量与计算值相一致；通过差热分析测得其分子中含两分子结晶水．mp为180．4℃，但按药典方法，不管是游离TUDCA，还是其钠盐．均难以测出其熔点，仅能测出发泡点．此现象可能与谈比合物结构有关。

    2．2合成的TLIDCA是一种极易溶于水的酸性化合物。通过磺酸基定性试验及对TuCA碱水解产物的薄层色谱分析，确证TuD-CA分子结构中含有磺酸基及熊去氧胆酰基团；薄层色谱表明，合成的TUDCA值在0．3l～0．32之间；TUDCA及UDCA的Grego-ry—Pascoe反应物吸收光谱比较结果，TUDCA最大吸收波长较UDCA向长波方向偏移5rirlq，表明TUDCA分子中牛磺酸基团对Grego-ry—Pasco~显色反应有显著影响。通过对合成产物的结构比较及性质的研究，证明我们合成的产物为游离牛磺熊去氧胆酸。