鸡胆汁抗炎作用

鸡胆汁有效成分CDCA 和TCDCA的抗炎作用研究

李培锋, 关　红, 哈斯苏荣, 曹金山

( 内蒙古农业大学动物科学与医学学院, 内蒙古呼和浩特　010018)

摘要: 　采用比较药理学研究方法对鸡胆汁的有效成分  鹅去氧胆酸(CDCA )和  牛磺酸鹅去氧胆酸(TCDCA )进行了抗炎作用研究。结果显示,CDCA和TCDCA均能极显著地抑制二甲苯所致小鼠耳壳炎症及小鼠皮肤毛细血管通透性增强。对小鼠棉球肉芽肿、大鼠角叉菜胶性足跖肿胀、大鼠甲醛性足跖肿胀以及炎性组织中 PGE2含量具有明显抑制作用。对大鼠角叉菜胶性足跖肿胀和甲醛性足跖肿胀, CDCA 和 TCDCA 的作用与其剂量呈明显的正相关, 且 TCDCA 的抗肿胀率作用比CDCA强。因而表明鸡胆汁的有效成分CDCA和TCDCA

对急慢性炎症均有很强的抑制作用。

关键词: 　鹅去氧胆酸; 牛磺酸鹅去氧胆酸; 抗炎作用;P GE2

中图分类号: S853. 731　　文献标识码: A　　文章编号: 1000-6354( 2002) 01-0007-04

鸡胆汁性味苦寒, 无毒, 是一种资源丰富、价格低廉的天然中药材。其药理学作用已有系统报道,具有清热解毒、止咳平喘、消炎、利胆、明目等功能。经研究证实鸡胆汁主要含有胆酸(CA )、CDCA和TCDCA等有效成分。据报道,CDCA对胆固醇型胆结石有很好的溶解作用, 此外还有镇静、镇痛、解痉、镇咳及祛痰等药理作用。而TCDCA的药理作用目前尚 在 研 究 之 中。为 了 进 一 步 探 索CDCA和TCDCA的药理作用, 充分发挥它们的临床疗效, 笔者等开展了对鸡胆汁中有效成分CDCA及TCDCA的抗炎作用研究。

1　实验材料

1. 1　动物

Wista r大白鼠, 体重 200±20g;纯昆明种小白鼠, 体重 20±2 g, 雌雄各半。由内蒙古大学实验动物研究中心提供。

1. 2　 药品

鸡胆汁由呼和浩特市食品公司屠宰场提供; CDCA和

TCDCA是由本课题组提取, 其中CDCA的纯度为98. 2% , TCDCA的纯度为97. 8% ; 地塞米松磷酸钠注射液, 广州明兴制药厂, 批号: 910209- 3。

1. 3　 仪器设备

721 分光光度计, 上海医用仪器厂;DH - 721型紫外可见分光光度计, 美国 Bechman 公司。

1. 4　 数据处理

实验结果用 x±S 表示, 两个样本平均数用 t 检验, 组间差别比较用F检验。

2　方法与结果

2. 1　 对二甲苯所致小鼠耳壳炎症的影响

取小鼠 60 只, 随机分成 6 组(n= 10) 。第 1 组为阴性对照, 按 10ml/ kg灌胃蒸馏水; 第2 组为CDCA低剂量组, 按 0. 150 g/kg 灌胃给药; 第 3 组为 CDCA高 剂 量组, 按 0.225 g/kg 灌 胃给 药; 第 4 组 为TCDCA低剂量组, 按 0. 100g / kg灌胃给药; 第 5 组为 T CDCA 高剂量组, 按 0. 200 g/kg 灌胃给药; 第 6组为地塞米松磷酸钠组, 按 0. 005 g/kg 经皮下注射给药; 每天给药一次。于第 4 天给药 1h后左耳壳滴二甲苯 20 μl。致炎后 30min脱臼处死小鼠。用直径0. 6 cm的穿孔器将两耳壳穿孔取下, 分别称重, 求出两耳重量差。以两耳重量差作为炎症肿胀程度的指标进行t检验, 结果见表 1。表 1 结果表明, 低剂量和高剂量的CDCA和TCDCA对二甲苯所致的小鼠耳壳肿胀均有极显著的抑制作用, 而且各药物不同剂量之间也无显著性差异。

表 1　对二甲苯所致小鼠耳壳肿胀的影响

注: * * * 表示与阴性对照组相比 P< 0. 001。

2. 2　 对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响

将 60 只小鼠, 随机分为 6 组( n= 10) , 分组顺序、给药途径、给药剂量同2. 1。第 4 天给药后1h,尾静脉注射 0. 5% 伊文斯蓝生理盐水0. 2 ml/10 g, 随即于每只小鼠背部皮内注入二甲苯 30μl 致炎, 20min后脱臼处死小鼠, 切开背部皮肤, 将蓝染的皮肤剪下并切碎放入 6 ml 丙酮生理盐水 7∶3 混合液中浸泡 24h, 2 000 r / min离心, 取上清液用 721分光光度计( K= 610nm)测定光密度(OD )值, 求出色素滤出量, 结果见表 2。

2. 3　对小鼠棉球肉芽肿的影响

将40只小鼠, 随机分为 4 组(n= 10) 。第1组为阴性对照组, 按 10 ml/kg 灌胃蒸馏 水; 第2组为CDCA 组, 按 0. 225 g / kg 灌胃 给 药。第3组为TCDCA组, 按 0. 200g / kg灌胃给药; 第 4 组为地塞米松磷酸钠组, 按0. 005g / kg经皮下注射给药。各鼠用乙醚麻醉, 背部剪毛消毒, 切一0. 5 cm 长的切口,从切口向两侧腋下各植入一个 5 mg 的灭菌棉球。从手术当日开始连续给药7d, 第8天脱臼处死小鼠,切开背部皮肤, 将棉球连同周围的肉芽组织一起取出, 剔除脂肪组织, 置60℃干燥箱烘干, 精确称取重量, 减去棉球重量即为肉芽组织增生的重量, 进行 t检验, 结果见表 3。

表 3 结果表明,CD CA和T CDCA均对小鼠棉球肉芽肿有极显著的抑制作用, 而且各药物之间无显著性差异。

2. 4　 对大鼠角叉菜胶性足跖肿胀率及炎性组织中

PGE2含量的影响按大鼠足跖肿胀法和紫外分光光度法。取大鼠36 只, 随机分成 6 组(n= 6) 。第 1 组为阴性对照组, 按10 ml/kg 灌胃蒸馏水; 第2组为 CDCA 低剂量组, 按 0. 150g/ kg灌胃给药; 第3 组为CDCA高剂量组, 按 0. 225g / kg灌胃给药; 第 4组为TCDCA低剂量组, 按0. 100 g/ kg 灌胃给药; 第 5 组为TCDCA高剂量组, 按 0. 200 g/kg 灌胃给药; 第 6 组为地塞米松磷酸钠组, 按 0. 005g / kg经皮下注射给药。各组连续给药 4d, 1次/d,末次给药后 1h,在每只大鼠右足跖部皮下注射 1% 角叉菜胶溶液 0. 1 ml 致炎。用游标卡尺分别测定致炎前及致炎后 1、2、3、4 h 的足跖厚度, 并按以下公式计算足跖肿胀率, 在致炎后 4h处死大鼠, 踝关节上 0. 5 cm 处剪下炎性肿胀足跖,称重、剪碎, 将其浸泡于 5m l生理盐水中 1h,离心浸泡液, 吸取上清液 50 μl,加 0. 5mo l KO H-甲醇溶液 1 ml, 在 50 ℃下异构化 20 min, 用甲醇稀释至20 ml, 于波长 278 nm 处测定其光密度( O D ) 值。根据标准曲线(r = 0. 9955) ,计算炎性足跖中PG E2的含量, 结果见表 4。

表 4 结果表明, CDCA 和 TCDCA 均能极显著地抑制大鼠角叉菜胶所致足跖肿胀率和炎性组织中PG E2含量, 而且CDCA和TCDCA两种药物的抗足跖肿胀作用与剂量呈明显的正相关性。实验结果还显示TCDCA 的抗角叉菜胶所致足跖肿胀作用比CDCA 强。

2. 5　对大鼠甲醛性足跖肿胀率及炎性组织中 P GE2含量的影响

分组顺序及给药途径、给药剂量、给药时间同2. 4。第 4 天给药后 1h大鼠左足皮下注射 5% 甲醛溶液 50 μl, 按 2. 4 方法测定并计算大鼠足跖肿胀率和炎性组织中 PGE2的含量, 结果见表 5。

表 5 结果表明, CDCA、T CDCA 均能极显著地抑制甲醛所致大鼠足跖肿胀率和炎性组织中PG E2含量, 而且 CDCA、T CDCA 两种药物在足跖的肿胀率上表现出很强的剂量依赖性。同时, 实验结果显示, T CDCA 抗甲醛所致足跖肿胀作用比 CDCA 强。

3　小结与讨论

3. 1　本实验结果显示, 鸡胆汁的有效成分CDCA、T CDCA 对小鼠耳壳肿胀、皮肤毛细血管通透性、棉球肉芽肿、大鼠的足跖肿胀率及炎性组织中P GE2含量等极显著的抑制作用, 表明 CDCA 和 TCDCA对急慢性炎症均有很强的抑制作用。

3. 2　在小鼠耳壳肿胀、皮肤毛细血管通透性、棉球肉芽肿等实验中, 各药不同剂量组间和不同药物间的药理作用强度未呈现显著性差异, 亦未表现出剂量依赖性关系, 但是大鼠的足跖肿胀实验中, CDCA、T CDCA两种药物在表现出剂量依赖性关系的同时,T CDCA还表现出比CD CA更强的抗肿胀作用。

3. 3　PG E2不仅是一种很强的炎症介质, 而且还有很强的致痛、致热作用。该实验证明了鸡胆汁的有效成分CDCA、TCDCA均能极显著地抑制角叉菜胶和甲醛所致炎性组织PGE2含量。这可能是CDCA、TCDCA 以及鸡胆汁的抗炎作用的重要机理之一。

参考文献

〔1〕　李培锋, 关　红, 哈斯苏荣等. 鸡胆汁的药理作用研究〔C〕. 中国畜牧兽医学会第十届全国会员代表大会暨学术年会论文集, 北京: 中国农业大学出版社, 1997, 335～337

〔2〕　陈　奇主编. 中药药理研究方法学〔M〕. 北京:人民卫生出版社, 1993, 370

〔3〕　叙叔云, 卞如廉, 陈　修主编. 药理实验方法学〔M〕. 北京: 人民卫生出版社, 1985, 523～538