蛇胆中牛黄胆酸的含量- 新闻详情：
高效液相色谱法测定蛇胆中牛黄胆酸的含量
张 丹, 徐月新
摘要：目的 测定蛇胆中牛黄胆酸的含量, 以控制其质量。方法 采用高效液相色谱外标法, 在 K= 210 nm 处测定蛇胆中牛黄胆酸的含量。结果 保留时间：牛黄胆酸 10m in; 回收率 101. 5% ; 线性相关系数 0. 999 8; 变异系数 1. 5% 。结论 此法专属性强, 可作为蛇胆的质量控制方法。
关键词：牛黄胆酸；蛇胆；高效液相色谱
中图分类号： R284. 2 文献标识码: B 文章编号: 1008-0805( 2006) 04-0522-01
蛇胆是一种常用中药, 它来源于眼镜蛇科及游蛇科等多种蛇类的胆。据文献报告, 蛇胆的主要成分为牛黄胆酸, 该酸的含量可从一个侧面反映蛇胆质量。目前已有方法有分光光度法, 薄层扫描。本文研究了用 HPLC法来检测蛇胆质量。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器 岛津 LC-6A 型高效液相色谱仪; 岛津 SPD-6AV 可变波长紫外检测仪; CDMC-ICX型色谱数据处理机 (上海计算机研究研所 )。
1. 2 试剂 牛黄胆酸标准品 (美国进口, 含量 98% 以上 ) ; 蛇胆( 胆汁: 胆 = 1：1): 甲醇 (南京化工厂 AR ) : 二次蒸馏水。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱: YWG C18ID45 4 mm×250 mm; 流速: 0. 8 m l/m in, 流动相:甲醇： 水：磷酸= 65：35：0. 2( V /V ); 柱压: 0. 9 ×100kg f/ cm2, 紫外检测波长 210 nm; 衰减 0.04; 纸速: 2 mm /m in。
2. 2 标准溶液的配制 精密称取牛黄胆酸标准品 ( 105℃干燥30m in) 19. 17 mg于 25 m l容量瓶中, 加入重蒸馏水溶解并稀释至刻度, 摇匀即得。
2. 3 标准曲线的绘制 精密量取牛黄胆酸标准液 0. 1, 0. 3, 0. 5,0. 7, 0. 9 m l分别置于带塞试管中, 均用重蒸馏水稀释至 2 m l, 各进样 2次, 20Ll/次, 以牛黄胆酸峰面积为纵坐标, 以浓度为横坐标, 求得回归方程为 Y= 580. 825±235 948. 25C ( r = 0. 999 8)。线性范围 0. 077~ 0. 69 mg /m。l
2. 4 蛇胆预处理及测定 精密取胆汁与胆酒配成 1：1供试液,离心。精密量取上清液 1 m l于 50 m l容量瓶中, 加入 80% 乙醇20 m l放置沉淀, 然后用二次蒸馏水加至刻度, 用滤膜 ( 0. 45 μm )过滤, 进样。据标准曲线的回归方程式计算机牛黄胆酸含量, 按本法测出蛇胆中牛黄胆酸含量与糠醛 - 硫酸比色法测得结果接近。见表1.
2. 5 回收率实验 采用标准添加法, 测得回收率为 101. 5% , cv为 1. 5% ( n= 5)。
3 讨论
流动相配比: 甲醇：水曾以80：20：70：30：60：40：55：45等比例配制, 但结果不满意, 用 65：35 比例可获得较理想的色谱参数; 在流动相中曾加入缓冲溶液调 pH 到 5. 6。但峰形较宽, 分离度不好。后改用磷酸调 pH 至 3来作离子控制, 峰形和分离度比用缓冲溶液要好。
牛黄胆酸在 205 nm左右有最大吸收率, 所以选定 210 nm 检测波长, 但在 210 nm 检测波长下, 检测器对甲醇、水和 HPO42-、H2PO4-离子浓度的改变敏感, 而且在 210 nm处许多物质有吸收峰, 曾考虑用衍生物法在 387 nm下检测, 但回收率比较低, 所以这就要对实验所用的试剂要求较高。
蛇胆预处理过程, 由于蛇胆中有效成分牛黄胆酸与蛇胆中含有的一些氨基酸类物质难以完全分离。
比色法作为含量测定方法, 其专属性不强, 属于一种非专属性含量测定方法, 在应用过程中必须附加其他的分析方法来达到总体的专属性, 如可附加一种专属的鉴别实验或色谱指纹图谱。而 HPLC法专属性很强无须增加其他分析方法。曾用离子交换树脂 717、大孔树脂、硅胶分配柱处理样品, 结果均不理想, 但大孔树脂除去一部分大包峰, 因此这步工作有待进一步探索。
