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比色法测蛇胆川贝液中胆酸含量
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利用糠醛比色法测蛇胆川贝液中胆酸含量,用氯仿萃取方法,除去糖分和其他干扰成分,提取蛇胆川贝液中的胆酸,再与糠醛、硫酸反应,最后进行比色测定。

1. 仪器与试剂

740型分光光度计

1%糠醛溶液:1mL蒸馏的糠醛加水至100mL混匀。

硫酸溶液:65mL水加硫酸50mL混匀即得。

60%醋酸:60mL冰醋酸加水至100mL,混匀。

2. 实验方法

(1)    样品抽取液的制备  准确量取蛇胆川贝液50mL,置于150mL分液漏斗,用氯仿提取3次,每次30mL。合并氯仿液,水浴蒸干,冷却后加60%醋酸溶液溶解,定溶于25mL容量瓶中。

   按照蛇胆川贝液处方及工艺,配制不含蛇胆汁的“蛇胆川贝液”,同样制备空白溶液备用。

(2)    比色液的制备 准确称取样品抽取液与空白液1mL,加1mL1%的新制糠醛液,水浴5min。加入13mL硫酸溶液于70.C水浴10min。迅速取出,于冰浴冷却2min,取出进行测定。空白用1mL水代替1mL新制的1%糠醛溶液。

取胆酸对照品适量,配制成30μg/mL的对照品液。统发操作,备用。

(3)    胆酸的可见光吸收光谱的绘制  取上述3种备用液和相应的空白液在波长450~700nm间描绘吸收光谱。结果,在650nm波长处有较强的吸收峰,且空白溶液吸收度小于0.01,可以认为无干扰。

(4)    标准曲线的备制  取胆酸对照品12.5mg25mL容量瓶中,用6%醋酸溶液溶解,定容,即得胆酸标准液。

 准确取标准液0.2mL0.4mL0.6mL0.8mL1mL分别置带试管中,用60%醋酸溶液稀释至1mL,其余同(2)项下“加1mL1%的新制糠醛。。。。。。”进行操作.

结果表明,样品浓度在033μgmL范围内有良好的线性关系。回归方程为:A=20.865C+0.0124r=0.998

(5)样品含量测定 分别取4批不同型号的样品进行测定

(6)回收实验  0.5mgmL胆酸标准液0.1mL,置于已知

量的样品溶液中,混匀,同步提取,操作。结果平均回收率为

99.5%,RSD=0.664%。

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